Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展比较慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现家兔自身基因表达到再次出现1HG白血病临床症状的困难重重率在学童时代就有较好的描述，多个家兔自身基因表达中性的学童中所有70%在血清转换后10短期内患上白血病，而随访15年的学童这一用到量增加到84%。相对于之下，占到临床1HG白血病一半以上的HG1HG白血病的发作机制还很难赢取充分的研究者。

日益多的人开始用到分期种系统来定义1HG白血病的困难重重：变异在再次出现多种家兔自身基因表达时转入第1过渡阶段，再次出现高血压异常时转入第2过渡阶段，再次出现症状时转入第3过渡阶段。一些多发家兔自身基因表达中性的变异，在1期和2期，困难重重较较慢，并的发展为发作的1HG白血病。我们早先描述了一第各别在首次检验到多种家兔自身基因表达抽样后至少10年无白血病的极较慢困难重重者，这第各别高血压人数少，但相似性颇为明确。随后，我们辨认出家兔自身抗原基因表达CD8+T细胞内底物在困难重重减较慢的高血压中所基本不共存，但在近期发作和一直共存的白血病高血压中所很容易检验到。这可能得出论据，与困难重重高血压相对于，这些高血压自身免疫底物的调节增强。

早期研究者得出论据，尽管调节性T细胞内(Treg)用到量经常性，但白血病高血压共存一些功用缺陷，其中所包括对IL-2的底物能力增加。此外，白血病高血压中所的效不宜CD4+T细胞内可能对调节突显抵抗性，乏善可陈为效不宜T细胞内的抑止移向，自然造成的Treg和躯外造成的抑止Treg，以及抗原历程的CD4+T细胞内中所IL-2底物移向。本研究者的意在是描述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在海岸边极减较慢困难重重者中所的相似性，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的高血压亲属中所安全检查1HG白血病的危险因素。我们早先描述了一直减较慢困难重重者的相似性，他们保持多重家兔自身基因表达中性最少10年，但很难再次出现白血病的临床症状，较慢性或非神经性自身免疫。随后，10名此后保持无白血病并愿意发放大量血液抽样的减较慢困难重重者划定T和B细胞内功用分析。在现今的研究者中所，8名较慢困难重重者(SP第各别)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的家兔自身基因表达中性。所有的发起者都处于1HG白血病困难重重的1期，尽管一些人随后保住了家兔自身基因表达对某些抗原的中性底物，然而，一名高血压已经处于2期至少6年，但很难再次出现临床症状，一名高血压被诊断为白血病，该受试者72岁，在捕获实验抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该ADP同步进行了另行分析。分离外周血单个质侄细胞内(PBMCs)，运用于多参数流式细胞内忍术和T细胞内抑止实验分析ADP中所Treg的频率、表HG和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和重回)同步进行无指导聚类分析，分析Treg表HG。

结果：与肥胖ADP相对于，来自较慢困难重重躯的知觉CD4+T细胞内的指导聚类推测，触发的知觉CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素抑止的TNFR无关复合物(GITR)传达增加有关。一名HbA1c增高的高血压与困难重重减较慢者和最简单的对照第各别相对于，Treg谱有所多种不同。功用分析得出论据，与肥胖ADP相对于，来自减较慢困难重重躯的Treg介导的CD4+效不宜T细胞内抑止相对来说损毁。乏善可陈为对效不宜CD4+T细胞内CD25和CD134传达的抑止增加。

布1 深入的表HG分析推测，CD4+Treg亚HG在较慢困难重重函数调用中所增加。由FlowSOM分解成的Treg寝室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物传达鉴定出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个多种不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个终端代表一个协同(100个协同)，相当大的元协同(10个元协同)在终端第各别周围上色。每个终端中所的饼布透露单个上标的传达级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整躯上标传达。(c, d)为HD第各别(c)和SP第各别(d)分解成布，以及FlowSOM上标的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于较核素为每个metacluster装入中央线布(核素> 0.05%)明确为HD和SP第各别:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。深蓝色格侄代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg频率的增加是困难重重减较慢的徽标。分级离侄通道(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和最简单的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团躯的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行分离，模拟FlowSOM小团躯。(b) HD(横纹)和SP(黑斑)第各别以及ADPSP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的频率概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离侄通道侄集的装入中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被上标为SP和HD函数调用彼此之间的多种不同。(j)装入中央线布推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)第各别中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于较核素(用到量)。(k)直方布推测每个簇的表HG(暗红色)和Treg上标相对于较传达与背景传达(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面四人，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

布3 与肥胖献血者相对于，困难重重减较慢者知觉treg的GITR增加。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个传达上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热布(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(黄色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方布(c)和概述布(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有ADP包括，p< 0.05(蓝色)ADPSP 606和最简单的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从分级离侄通道，从所有HD(黄色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，推测直方布(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

布4 来自减较慢困难重重的CD4+ treg细胞内控制效不宜CD4+T细胞内的能力增加。SP第各别用蓝色的中央线和格侄透露，HD第各别用黑色的中央线和格侄透露，深蓝色的中央线/格侄透露ADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(不宜答者)被上标为CFSE, Treg按通过观察的用到量反应物。用抗CD3 /28微珠转化细胞内，培育出3紧接著同步进行流式细胞内忍术检验。(a-d)与CD4+不宜答者相对于较不宜的treg培育出(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比率。用到中性对照(触发的响不宜细胞内包含treg)计算抑止比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效不宜CD4+T细胞内对减较慢困难重重的T细胞内转化的抑止更加敏感。SP第各别用蓝色的中央线和格侄透露，HD第各别用黑色的中央线和格侄透露，深蓝色的中央线/格侄透露ADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel上标，treg按通过观察的用到量反应物。用抗CD3 /28微珠转化细胞内，培育出3紧接著同步进行流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因侄分析。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者协同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们证明了的论据是，来自减较慢困难重重侄的转化知觉CD4+Treg在GITR传达中所赢取了拓展和丰沛，合理化了全面研究者Treg在1HG白血病可能性变异中所的异质性的不足之处。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28